總黃酮含量作為類保健品的功效含有，是蜂膠液中間體和成品的重要指標(biāo)，對(duì)它的有效控制可直接反映出產(chǎn)品質(zhì)量。根據(jù)實(shí)驗(yàn)者的發(fā)現(xiàn)，總黃酮的測(cè)定用的蘆丁對(duì)照品溶液（精密稱取蘆丁對(duì)照品適量，約含蘆丁200mg，置250ml容量瓶中，加甲醇175ml，置水浴上微熱溶解，放冷，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。精密量取25ml，置100ml容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得）這一段時(shí)間內(nèi)有析出現(xiàn)象，搖勻后即出現(xiàn)渾濁，因此只能即配即用，在一定程度上造成對(duì)照品的浪費(fèi)和檢查時(shí)間的延誤。
對(duì)此我們對(duì)蘆丁對(duì)照品溶液的制備方法進(jìn)行了合理的改進(jìn)，得出多組數(shù)據(jù)，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，證明改進(jìn)后的方法能更好地適用于樣品檢測(cè)。
1、儀器與試劑1.1儀器6010型紫外-可見光分光光度計(jì)（惠普傷害分析儀器廠）；GKCR112型可控硅控溫水浴鍋（南通滬通實(shí)驗(yàn)儀器廠）；AE-240型電子天平（梅特勒托利多）。1.2試劑水為純化水，甲醇、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉均為分析純。蘆丁對(duì)照品（中國(guó)制劑品生物制品檢驗(yàn)所）1.3樣品蜂膠液（批號(hào)：070514）南京老山制劑業(yè)股份有限公司生產(chǎn)。
2、方法2.1兩種對(duì)照品溶液的制備方法改進(jìn)前（方法一）：精密稱取蘆丁對(duì)照品適量（約含蘆丁200mg，置250ml容量瓶中，加甲醇175ml，置水浴上微熱溶解，放冷，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。精密量取25ml，置100ml容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得。（每毫升含無水蘆丁0.2mg））。改進(jìn)后（方法二）：精密稱取蘆丁對(duì)照品適量 約含蘆丁40mg，置200ml容量瓶中，加甲醇適量，置水浴上微熱溶解，放冷，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。每毫升含無水蘆丁0.2mg。2.2對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備與測(cè)定精密量取對(duì)照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml，分別置于50ml容量瓶中，各加水至5ml，加5%亞硝酸鈉溶液1ml，混勻，放置6min，加10%硝酸鋁溶液1ml，混勻，放置6min，加氫氧化鈉試液10ml，再加水至刻度，搖勻。立即用紫外分光光度法計(jì)在510mm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，以吸收度為橫坐標(biāo)，濃度或毫克數(shù)為縱坐標(biāo)，計(jì)算回歸方程。2.3樣品的制備與測(cè)定精密量取蜂膠液1ml，置于50ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。再精密量取1ml，置于50ml容量瓶中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制項(xiàng)下的方法，自“加水至5ml，加5%亞硝酸鈉溶液1ml，混勻。。。”起依法測(cè)定吸光度。
3、結(jié)果與分析采用兩種不同方法對(duì)蘆丁對(duì)照品溶液進(jìn)行配制，分別對(duì)同一批蜂膠液按標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程規(guī)定的方法進(jìn)行多次試驗(yàn)。根據(jù)其結(jié)果，對(duì)其進(jìn)行方差分析，判斷兩種配制方法在檢驗(yàn)結(jié)果上有無顯著性差異。3.1結(jié)果樣品檢驗(yàn)結(jié)果見表1表1 樣品檢驗(yàn)結(jié)果 單位：mg/ml 檢驗(yàn)日期 方法一檢驗(yàn)結(jié)果A1 方法二檢驗(yàn)結(jié)果A2 （A1-Y）2 （A2-Y）2 2007.5.14 53.5 53.6 0.0784 0.1444 2007.5.21 52.4 53.4 0.6724 0.0324 2007.5.28 53.1 53.4 0.0144 0.0324 2007.6.4 53.3 52.7 0.0064 0.2704 2007.6.11 53.4 53.4 0.0324 0.0324 2007.6.19 52.4 53.2 0.6724 0.0004 2007.6.27 53.6 53.6 0.1444 0.1444 2007.7.5 52.4 52.4 0.6724 0.6724 2007.7.12 54.3 53.0 1.1664 0.0484 2007.7.19 54.3 53.0 1.1664 0.0484 平均值 Y1=53.27 Y2=53.17 總均值 Y=53.22 注1：方法一檢驗(yàn)結(jié)果是使用改進(jìn)前的對(duì)照品配制方法。注2：方法二檢驗(yàn)結(jié)果是使用改進(jìn)后的對(duì)照品配制方法。3.2結(jié)果評(píng)判在一個(gè)因子兩個(gè)水平A1和A2下（即選用兩種不同配置方法的對(duì)照品），分別得到10組檢驗(yàn)結(jié)果，假設(shè)其均值相等，取顯著水平α=0.005，計(jì)算統(tǒng)計(jì)量F，判斷結(jié)果有無顯著性差異。如F＜F（1-α）（fa，fe）時(shí)則接受假設(shè)，兩種配制方法所得的結(jié)果無顯著性差異，說明改進(jìn)后的標(biāo)準(zhǔn)品溶液能完全適用于蜂膠液總黃酮的測(cè)定；若F＜F（1-α）（fa，fe）時(shí)則拒絕假設(shè)，兩種結(jié)果又顯著性差異，說明改進(jìn)后的標(biāo)準(zhǔn)品不適用于蜂膠液總黃酮的測(cè)定。3.3統(tǒng)計(jì)分析通過F實(shí)驗(yàn)，經(jīng)計(jì)算F=0.15。查表得F0.95（1，18）=4.41，得F＜F0.95（1，18），故接受假設(shè)，兩者均值無顯著性差異，說明改進(jìn)后的標(biāo)準(zhǔn)品不適用于蜂膠液總黃酮的測(cè)定。
4、結(jié)論（1）方法二制備的蘆丁對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液，放置一段時(shí)間后不出現(xiàn)沉淀現(xiàn)象。可以重復(fù)使用，且結(jié)果重現(xiàn)性好。（2）用兩種制備蘆丁對(duì)照品溶液的方法檢測(cè)蜂膠液中的總黃酮均值無顯著差異，說明改進(jìn)后的對(duì)照品溶液（方法二）能更準(zhǔn)確有效地適用于蜂膠液總黃酮的測(cè)定。蜂膠
